Статья «ENHANCED EXPRESSION OF AN IRON-SULFUR PROTEIN SLr0351 OF sp. PCC 6803 IN BY TRUNCATING THE TRANSMEMBRANE REGION, "Биоорганическая химия"»

Повышение экспрессии Fe-S белка Slr0351 из Synechocystis sp. PCC 6803 в E. coli путем усечения его трансмембранной фрагмента. Железосерные белки являются важными компонентами фотосинтетического электрон-транспортного комплекса в мембранах тилакоидов цианобактерий. Целью данного исследования было повышение уровня экспрессии предполагаемого железосерного белка Slr0351 в E. coli путем усечения его трансмембранной части и исследование связывающих свойств железосерного кластера. Удаление N-концевого трансмембранного фрагмента Slr0351 (образец Slr0351_tr) привело к более высоким выходам и повышенной по сравнению с Slr0351 растворимости Slr0351_tr, экспрессируемого E. coli BL21 (DE3); при этом отпала необходимость в добавлении Fe2+ and S2- в питательную среду LB. С помощью аффинной хроматографии в анаэробных условиях мы получили очищенные препараты Slr0351 и Slr0351_tr. В отличие от полноразмерного белка, Slr0351_tr был коричневого цвета и имел выраженный пик поглощения при 460 нм, что характерно для железосерных кластеров. Для установления остатков цистеина, участвующих в образовании Fe-S кластера в Slr0351_tr, мы получили четыре мутантных белка с помощью сайт-направленного мутагенеза. Судя по исчезновению пика поглощения на 460 нм в мутантах, в образовании кластера участвуют остатки C140, C141, and C288. Результаты работы подтверждают, что Slr0351 является железосерным белком.