Статья «ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ЭКСПРЕССИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ФОСФОЛИПАЗЫ А1 ИЗ НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS НА СТРУКТУРУ И СВОЙСТВА ТЕЛЕЦ ВКЛЮЧЕНИЯ, "Биоорганическая химия"»

Изучено влияние концентрации индуктора (IPTG) и времени индукции при температуре 37 °C на гетерологический синтез в виде телец включения (ТВ) зрелого мембранного белка фосфолипазы А1 (PldA) Yersinia pseudotuberculosis, а также на физико-химические и структурные характеристики ТВ. С помощью электронной микроскопии, динамического светорассеяния, оптической спектроскопии для ТВ были определены размер, форма, стабильность (растворимость в мочевине и детергентах, устойчивость к протеолизу), вторичная структура белка ТВ и наличие амилоидных структур. Было установлено, что ТВ имеют близкую к сферической форму и шероховатую поверхность, расщепляются протеиназой К и содержат белок с упорядоченной вторичной структурой. Белок ТВ имеет упорядоченную вторичную структуру с высоким содержанием ?-структуры. С увеличением концентрации индуктора и времени экспрессии конформация рекомбинантного белка в ТВ изменяется в сторону менее нативной, на что указывает увеличение стабильности ТВ и уменьшение ферментативной активности белка. При растворении ТВ в 0.06% SDS и в 5 M мочевине рекомбинантный белок сохраняет вторичную структуру в частично модифицированном виде, и добавление цвиттер-ионного детергента в мицеллярной концентрации не трансформирует конформацию белка в нативную.