Статья «СТРУКТУРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО РОСТОВОГО ДОМЕНА УРОКИНАЗЫ, "Биохимия"»

Активатор плазминогена урокиназного типа (uPA) является сериновой протеазой, которая переводит профермент плазминоген в протеолитически активную форму плазмин. Урокиназа синтезируется и секретиру-ется в виде одноцепочечной молекулы, состоящей из TV-концевого домена (GFD), крингл-домена (KD) и С-концевого протеолитического домена (PD). Структура ATF (фрагмент урокиназы, состоящий из GFD и KD) в свободном состоянии и в комплексе с рецептором урокиназы (uPAR, CD87), лишенным ГФИ-якоря, была изучена ранее методами ЯМР (Hansen et al., 1994) и рентгеноструктурного анализа (Barinka et al., 2006). Согласно полученным данным, в структуре GFD выделяют две области, состоящие из Р-слоев, ориентированных перпендикулярно друг к другу. GFD-область, отвечающая за связывание с uPAR, расположена в подвижной ?1-петле, состоящей из семи аминокислотных остатков и соединяющей два тяжа антипараллельного Р-слоя. Методом точечного мутагенеза было показано, что укорачивание ?1-петли на одну аминокислоту приводит к неспособности GFD взаимодействовать с uPAR (Magdolen et al., 1996). В отличие от вышеупомянутых данных, мы не получили каких-либо признаков наличия участков Р-слоев в GFD в полученных нами образцах uPA как в свободном состоянии, так и в комплексе с uPAR. GFD представляется достаточно гибким и неструктурированным доменом, способным, тем не менее, к высокоспецифичному взаимодействию с uPAR как in vitro, так и в экспериментах с клеточными культурами. Для оценки вторичной структуры GFD урокиназы мы использовали круговой дихроизм, изменение флюоресценции триптофана при температурной денатурации белка и гетероядерную ЯМР-спектроскопию ATF, меченного ¹⁵N и ¹³C, в свободном состоянии и в комплексе с uPAR. Принятые сокращения: uPA — активатор плазминогена урокиназного типа, урокиназа (PLAU); scuPA — одноцепочечная форма урокиназы; GFD — TV-концевой домен uPA; KD — крингл-домен; PD — С-концевой каталитический домен урокиназы; ATF — аминотерминальный фрагмент урокиназы, синоним большой, регуляторной или А субъединицы uPA; uPAR — клеточный мембран-связанный рецептор урокиназы (PLAUR); suPAR — лишенный гликозилфосфатидилинозитольного (ГФИ) якоря водорастворимый рецептор для урокиназы, не способный к внутриклеточной сигнализации; ГФИ — гликозилфосфатидилинозитол; EGF — эпидермальный ростовой фактор; TGFalpha — трансформирующий ростовой фактор альфа (TGFA); EGFR — рецептор эпидермального ростового фактора (EGFR); HB-EGF — гепарин-зависимый EGF-подобный ростовой фактор (HBEGF); ERBB2 — рецептор — тирозин протеин киназа 2 (ERBB2); ERBB3 — рецептор — тирозин протеин киназа 3 (ERBB3). В скобках приведены официальные названия белков в номенклатуре UniProtKB/Swiss-Prot.