Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста
Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста

Статья «Направленная искусственная эволюция атразинхлоргидролазы и характеристика мутантных форм фермента, обладающих повышенной каталитической активностью, "Биохимия"»

Авторы:
  • Ванг Ю.
  • Ли К.
  • Чен К.
  • Чен Д.
стр. 1412-1421
Платно
  • В выпуске: №10, 2013, Том 78
  • В журнале: Биохимия
  • Издательство: ФГУП «Издательство «Наука»
  • Рубрика ГРНТИ: Химия. Биология. Медицина.
  • Год выхода: 2013
  • SDI: 007.001.0320-9725.2013.000.010.1412.1421
  • ISSN: 0320-9725
Ключевые слова:
  • kinetic parameter
  • atrazine chlorohydrolase (AtzA)
  • DNA shuffling
  • Homology modeling
  • error-prone PCR (EP-PCR)
  • азаринхлоргидролаза (AtzA)
  • перетасовывание ДНК
  • гомологическое моделирование
  • ПЦР с ошибочным копированием (EP-PCR)
Аннотация:
Атразинхлоргидролаза (AtzA, EC 3.8.1.8) привлекла внимание в связи с тем, что катализирует превращение ядовитого атразина в малотоксичный гидроксиатразин и может быть использована для биодеградации этого гербицида. Для поиска удачных разновидностей гена а tzA в библиотеке случайных мутантов был применен метод селекции клонов, основанный на использовании одноклеточной водоросли Haematococcus pluvialis. В результате были получены восемь мутантных разновидностей фермента, обладающих повышенной каталитической активностью, превышающей активность AtzA «дикого» типа в 2,7–5 раз. Секвенирование показало, что две из этих активных форм содержали единичные точечные замены остатков Val12 и Leu395 соответственно. Другие усовершенствованные мутантные формы фермента несли замены одновременно в четырех аминокислотных остатках: Met315, His399, Asn429 и Val466, что свидетельствовало о важности всех шести остатков для активности AtzA. Анализ кинетики хлоргидролазной реакции показал, что пять мутантных разновидностей фермента имели K <sub>m </sub>в 0,6–0,9 раз меньшую, а каталитическая эффективность ( k <sub>cat</sub>/ K <sub>m</sub>) у всех восьми мутантных форм была в 2,5–4,1 раз более высокой по сравнению с «дикой» формой атразинхлоргидролазы. Моделирование трехмерной третичной структуры молекулы показало, что AtzA содержит домен ( ?/? ) <sub>8</sub>, характерный для надсемейства амидогидролаз, а также домен, состоящий из двух связанных между собой параллельных ? -слоев. Ион железа и пять взаимодействующих с ним аминокислотных остатков были локализованы в центральном ? -барреле домена ( ?/? ) <sub>8</sub>. Некоторые из вышеупомянутых аминокислотных остатков участвовали в формировании водородных связей внутри ? -слоя, соседствующего с доменом ( ?/? ) <sub>8</sub>.

Архивные статьи (2015 год и ранее) доступны для ознакомления бесплатно, для скачивания их необходимо приобрести. Для просмотра материалов необходимо зарегистрироваться и авторизоваться на сайте.

Чтобы приобрести доступ к материалу для юридического лица, пожалуйста, свяжитесь с администрацией портала с помощью формы обратной связи либо по электронному адресу libnauka@naukaran.com.  

Действия с материалами доступны только авторизованным пользователям.