Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста
Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста

Статья «ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ МЕТИЛИРОВАНИЯ ДНК МЕТИЛТРАНСФЕРАЗОЙ DNMT3A С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТИЛЗАВИСИМЫХ ЭНДОНУКЛЕАЗ РЕСТРИКЦИИ, "Молекулярная биология"»

Авторы:
  • Сергеев А.В.1
  • Кирсанова О. В.2
  • Лойко А. Г.3
  • Номероцкая Е. И.4
  • Громова Е.С.5
стр. 318-325
Платно
1 Воронежский государственный технический университет, 2 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, 3 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, 4 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, 5 Московский государственный университет
Ключевые слова:
  • метилирование ДНК
  • метилзависимые эндонуклеазы
  • эукариотические ДНК-метилтрансферазы
  • степень метилирования
  • DNA methylation
  • methyl-dependent restriction endonucleases
  • eukaryotic DNA methyltransferase
  • methylation efficiency
Аннотация:
Метилирование ДНК по остаткам цитозина в CрG-сайтах ДНК-метилтрансферазами (МТазами) вовлечено в важнейшие биологические процессы. Эукариотическая МТаза Dnmt3a является ключевым ферментом, устанавливающим de novo “рисунок” метилирования. Разработан метод определения степени метилирования ДНК МТазой Dnmt3a мыши in vitro c использованием метилзависимых эндонуклеаз рестрикции (МЗ-ЭР), специфически расщепляющих метилированную ДНК. В работе использован каталитический домен Dnmt3a (Dnmt3a-CD) и метилзависимые эндонуклеазы KroI и PcsI. После последовательных реакций метилирования и расщепления флуоресцентно меченных ДНК-субстратов продукты реакций визуализируют в полиакриламидном геле и определяют степень метилирования. Опробованы разные субстраты каждой эндонуклеазы, в том числе частично метилированные. Оптимальной оказалась PcsI, содержащая в участке узнавания два метилированных CpG-сайта, разделенных 7?п.н., что примерно соответствует расстоянию между активными центрами тетрамера Dnmt3a-CD. Сконструирован оптимальный субстрат, содержащий два метилированных остатка цитозина и два цитозина-мишени в ориентации, необходимой для метилирования МТазой Dnmt3a-CD. Нами разработан надежный, простой и недорогой метод, не требующий использования радиоактивной метки. Метод полезен для оценки эффективности ингибиторов Dnmt3a как потенциальных терапевтических препаратов и определения особенностей функционирования этого фермента.

Архивные статьи (2015 год и ранее) доступны для ознакомления бесплатно, для скачивания их необходимо приобрести. Для просмотра материалов необходимо зарегистрироваться и авторизоваться на сайте.

Чтобы приобрести доступ к материалу для юридического лица, пожалуйста, свяжитесь с администрацией портала с помощью формы обратной связи либо по электронному адресу libnauka@naukaran.com.  

Действия с материалами доступны только авторизованным пользователям.