Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста
Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста

Статья «РЕКОМБИНАНТНАЯ ПРОДУКЦИЯ, РЕКОНСТРУКЦИЯ В ЛИПИД-БЕЛКОВЫЕ НАНОДИСКИ И ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ ПОЛНОРАЗМЕРНОЙ ?-СУБЪЕДИНИЦЫ КАЛИЕВОГО КАНАЛА Kv7.1 ЧЕЛОВЕКА, "Биохимия"»

Авторы:
  • Шенкарев З.О.1
  • Карлова М. Г.2
  • Кульбацкий Д. С.3
  • Кирпичников М.П.4
  • Люкманова Е.Н.5
  • Соколова О.С.6
стр. 735-748
Платно
1 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 2 МГУ им. М.В. Ломоносова, 3 ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН; МГУ имени М.В. Ломоносова, 4 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, 5 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 6 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
  • В выпуске: №5, 2018, Том 83
  • В журнале: Биохимия
  • Издательство: ФГУП «Издательство «Наука»
  • Рубрика ГРНТИ: Химия. Биология. Медицина.
  • Год выхода: 2018
  • SDI: 007.001.0320-9725.2018.083.005.9
  • УДК: 577.322
Ключевые слова:
  • ионный канал Kv7.1
  • Pichia pastoris
  • липид-белковые нанодиски
  • электронная микроскопия макромолекул
  • ion channel Kv7.1
  • Pichia pastoris
  • lipid-protein nanodiscs
  • electron microscopy of macromolecules
Аннотация:
Потенциалозависимый калиевый канал Kv7.1 играет важную роль в возбудимости клеток сердечной мышцы. Основным структурным элементом этого канала является ?-субъединица KCNQ1. При тетрамеризации KCNQ1 в мембране формируется ионный канал, включающий пору и четыре потенциалочувствительных домена. Мутации в гене KCNQ1 человека являются одной из основных причин наследственной аритмии - синдрома удлиненного интервала QT. В представленной работе получена синтетическая конструкция, кодирующая полноразмерный белок KCNQ1 человека, и разработана система его экспрессии в клетках дрожжей Pichia pastoris. Мембранную фракцию клеток дрожжей, содержавшую рекомбинантный белок (rKCNQ1), солюбилизировали с помощью детергента CHAPS. Для моделирования липидного окружения канала, близкого к природному, из солюбилизированной мембранной фракции получали липид-белковые нанодиски на основе белка MSP2N2. Нанодиски, содержавшие целевой белок, отделяли с помощью очистки на аффинной смоле, используя последовательность rho1D4, представленную на С-конце rKCNQ1. Схожим образом была проведена очистка препарата rKCNQ1, солюбилизированного в CHAPS. Полученные препараты изучали с помощью просвечивающей электронной микроскопии с негативным контрастированием. Анализ микрофотографий показал, что оба использованных подхода позволили получить гомогенные препараты rKCNQ1. Статистический анализ изображений индивидуальных частиц белка, солюбилизированного в детергенте, показал наличие тетрамерной структуры, свойственной природному каналу. Реконструированная с разрешением 2,5 нм трехмерная структура канала представляет собой компактную плотность с диаметром мембранной части ~9 нм и высотой ~11 нм. Анализ изображений Kv7.1 в нанодисках выявил наличие дополнительного пояса электронной плотности, соответствующего фрагменту липидного бислоя и белку MSP2N2. Полученные данные показывают, что нанодиски могут быть успешно использованы для выделения, очистки, стабилизации в растворе и дальнейших структурных исследований канала Kv7.1 человека.

Архивные статьи (2015 год и ранее) доступны для ознакомления бесплатно, для скачивания их необходимо приобрести. Для просмотра материалов необходимо зарегистрироваться и авторизоваться на сайте.

Чтобы приобрести доступ к материалу для юридического лица, пожалуйста, свяжитесь с администрацией портала с помощью формы обратной связи либо по электронному адресу libnauka@naukaran.com.  

Действия с материалами доступны только авторизованным пользователям.