Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста
Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста

Статья «ХИМЕРНЫЕ Fab-ФРАГМЕНТЫ АНТИТЕЛ К РЕКОМБИНАНТНОМУ ГЛИКОПРОТЕИНУ ВИРУСА ЭБОЛА, "Биоорганическая химия"»

Авторы:
  • Панина А.А.1
  • Дементьева И.Г.2
  • Алиев Т.К.3
  • Топорова В. А.4
  • Боков М.Н.5
  • Позднякова Л.П.6
  • Шемчукова О.Б.7
  • Долгих Д.А.8
  • Свешников П.Г.9
  • Кирпичников М.П.10
стр. 389-401
Платно
1 Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской Академии наук, Москва, 2 Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва, 3 ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10, 4 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 5 Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва, 6 Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва, 7 Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва, 117638, 8 ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117?997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10, 9 Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва, 10 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова
Ключевые слова:
  • вирус геморрагической лихорадки Эбола
  • терапевтические моноклональные антитела
  • Fab-фрагмент
  • Ebola hemorrhagic fever virus
  • therapeutic monoclonal antibodies
  • Fab fragment
Аннотация:
Ранее нами были установлены нуклеотидные и аминокислотные последовательности вариабельных доменов трех мышиных моноклональных антител, специфичных к индивидуальным эпитопам гликопротеина вируса Эбола: GPE118 (IgG), GPE325 (IgM) и GPE534 (IgG) [1]. В настоящей работе на основе вариабельных доменов мышиных антител путем присоединения к ним константных участков CH1 и CL каппа-IgG! человека получены химерные Fab-фрагменты антител Fab118, Fab325, Fab534. Проведена наработка рекомбинантных химерных Fab-фрагментов в системе гетерологической экспрессии Escherichia coli, а также их выделение и очистка с использованием аффинной металл-хелатной хроматографии. Изучены иммунохимические свойства полученных Fab-фрагментов методами иммуноблоттинга, а также непрямого и конкурентного ИФА с использованием рекомбинантных белков вируса Эбола - EBOV rGPdTM (рекомбинантный гликопротеин вируса геморрагической лихорадки Эбола без трансмембранного домена), NP (нуклеопротеин) и VP40 (структурный белок). Доказана подлинность рекомбинантных химерных Fab-фрагментов, а также их специфичность по отношению к рекомбинантному гликопротеину вируса геморрагической лихорадки Эбола (EBOV GP). Результаты непрямого ИФА свидетельствуют об отсутствии перекрестного иммунологического взаимодействия с белками NP и VP40 вируса Эбола. Определены константы диссоциации комплекса антиген-антитело X для Fab 118, Fab 325 и Fab 534, равные соответственно 5.0, 1.0 и 1.0 нМ и указывающие на высокое сродство полученных экспериментальных образцов к EBOV GP. Исследована эпитопная специфичность Fab-фрагментов с использованием панели коммерческих нейтрализующих антител. Установлено, что все исследуемые антитела против EBOV GP направлены против разных эпитопов, при этом эпитопы рекомбинантных химерных Fab-фрагментов и исходных мышиных моноклональных антител (мАТ) совпадают. Все полученные и исследованные нами мАТ против EBOV GP специфичны к эпитопам, совпадающим или перекрывающимся с эпитопами трех коммерческих нейтрализующих мАТ против вируса Эбола: эпитопы Fab 118 и Fab 325 перекрываются с эпитопом известного коммерческого мАТ h13F6, эпитоп Fab 325 перекрывается также с эпитопом мАТ c6D8; эпитоп Fab 534 расположен вблизи конформационного эпитопа мАТ KZ52, в образовании которого принимают участие аминокислотные остатки из доменов GP1 и GP2 EBOV GP.

Архивные статьи (2015 год и ранее) доступны для ознакомления бесплатно, для скачивания их необходимо приобрести. Для просмотра материалов необходимо зарегистрироваться и авторизоваться на сайте.

Чтобы приобрести доступ к материалу для юридического лица, пожалуйста, свяжитесь с администрацией портала с помощью формы обратной связи либо по электронному адресу libnauka@naukaran.com.  

Действия с материалами доступны только авторизованным пользователям.