Статья «ПОЛУЧЕНИЕ И СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИНИИ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК, выделенных из краИнеИ плоти двух доноров ОДНОГО ВОЗРАСТА, "Цитология"»

Получены две новые неимморталнзованные линии из крайней плоти доноров одного возраста (2.5 года), названные FRSN-1 и FRSN-2. На 6-м пассаже проведен анализ ростовых характеристик и дифференцировочного потенциала этих линий и подтвержден для них статус мезенхимных стволовых клеток (МСК). Ряд характеристик анализировали в процессе длительного культивирования до 26-го пассажа. Время начала и динамика процесса репликативного старения, определенного по активности Р-га-лактозидазы, различается между линиями. Но к 26-му пассажу процесс репликативного старения одинаково усиливается в обеих линиях. Эффективность клонирования на 6-м пассаже различается между линиями: в FRSN-1 она значительно выше, чем в линии FRSN-2. На 26-м пассаже эффективность клонирования значительно снижается в FRSN-1, а в FRSN-2 клетки теряют эту способность. Кривые роста, полученные на 6-м пассаже, свидетельствуют об активной пролиферации обеих линий. Среднее время удвоения клеточных популяций у линий на 6-м пассаже не различается и составляет 36.9 ± 0.2 и 39.0 ± 0.8 ч соответственно. Пролиферативная активность в обеих линиях на 26-м пассаже снижается, среднее время удвоения клеточной популяции увеличивается, причем в клетках FRSN-2 оно значительно больше, чем в FRSN-1. Характер кривых роста линий существенно различается. Морфологический анализ показывает типичные для фазы старения изменения, связанные с увеличением размера и степенью распластанности клеток. Количественный и структурный кариотипический анализ, проведенный на 6-м пассаже, показал, что обе линии имеют нормальный кариотип человека (46, XY) и существенно не различаются по частоте хромосомных перестроек. Для определения статуса клеток анализ поверхностных маркеров на 6-м пассаже выявил в обеих линиях экспрессию поверхностных антигенов, характерных для МСК человека (CD44, CD73, CD90, CD105 и HLA ABC), и отсутствие экспрессии CD34, CD45 и HLA DR. В клетках обеих линий экспрессируются маркеры недифференцированных эмбриональных стволовых клеток человека (ЭСК) - SSEA-4 и SOX 2. Экспрессия SSEA-4 на 26-м пассаже не отличается от таковой 6-го пассажа. Обе линии экспрессируют маркеры ранней дифференцировки ЭСК в производные трех зародышевых листков. Клетки обеих линий на 6-м пассаже способны дифференцироваться в адипогенном, остеогенном и хондрогенном направлениях, что также подтверждает статус МСК. Ади-погенный потенциал значительно снижается у обеих линий в течение 20 пассажей. Эти данные свидетельствуют о том, что уже при среднем уровне репликативного старения наблюдается изменение адипо-генного дифференцировочного потенциала в отличие от неизменных ростовых характеристик. По-видимому, репликативное старение клеток вносит существенный вклад в изменение дифференцировочного потенциала МСК. В целом полученные результаты свидетельствуют о существовании ряда различий между линиями, полученными от разных доноров, по ростовым характеристикам и характеру репликативного старения. Эти различия могут быть обусловлены как непосредственным генетическим влиянием, так и опосредованно - разным микроокружением, которое детерминирует свойства клеток еще до выделения их из организмов доноров.