Статья «Протеомный анализ примесей в рекомбинантных мембранных гемопротеинах, экспрессированных в и выделенных c использованием металло-аффинной хроматографии, "Прикладная биохимия и микробиология"»

В 14 препаратах рекомбинантных мембранных гемо- и флавопротеинов человека, экспрессированных в и очищенных металл-хелатной аффинной хроматографией, “shot-gun” протеомным анализом идентифицированы примесные белки бактериальной клетки. Металл-хелатную аффинную хроматографию 10 белков осуществляли на сорбенте NiNTA-сефароза 6В, а для очистки остальных 4-х использовали лиганд-аффинную хроматографию на 2',5'-АДФ-сефарозе 4В. В анализируемых препаратах было обнаружено около 50 примесных белков. Во многих препаратах присутствовал фактор элонгации Tu 2, характеризующийся большим дипольным моментом и кластерным расположением кислых аминокислотных остатков, которые обеспечивают специфическое взаимодействие с сорбентом. Пептидил-пролил цис-транс изомераза SlyD, глутамин-фруктоза-6?фосфат аминотрансфераза и каталаза HPII, содержащие повторяющиеся последовательности HxH, QxQ и RxR и способные специфически взаимодействовать с сорбентом, также были обнаружены в составе примесных белков. Шаперонины GroL/GroS, предположительно, выделялись в комплексе с целевым белком. При проведении хроматографии с сорбента диссоциируют катионы Ni, что приводит к образованию свободных карбоксильных групп, придающих ему катионо-обменные свойства. Это могло быть причиной появления в препаратах основных белков, в том числе, рибосомальных белков и часто встречаемого не охарактеризованного белка YqjD Результаты анализа указывают на то, что состав примесей может изменяться в зависимости от природы экспрессируемого белка, что связано с реакцией протеома клетки на экспрессию чужеродного белка. Сделано заключение, что при наличии информации об аминокислотных последовательностях белков протеома клетки, в которой экспрессировался рекомбинантный белок, можно прогнозировать природу белковых примесей, присутствующих в нем после очистки методом металл-хелатной аффинной хроматографии на различных сорбентах.