Статья «МОДЕЛИРОВАНИЕ ГИПОКСИИ В?КЛЕТКАХ РАКА ПОЧКИ ПРИ ПОМОЩИ CRISPR/CAS9-РЕДАКТИРОВАНИЯ, "Молекулярная биология"»

Неконтролируемый рост клеточной массы при онкологических заболеваниях приводит к?усиленному ангиогенезу, но даже это не помогает раковым клеткам полностью удовлетворить потребность в?питательных веществах и?кислороде. Гипоксия является сопутствующим раковой трансформации процессом и?вызывает изменение профиля метилирования ДНК в?солидных опухолях, в?том числе гиперметилирования промоторов генов онкосупрессоров. Частично это связано со снижением активности Tet-белков в?условиях недостатка свободных радикалов кислорода. Ключевое молекулярное событие при индукции гипоксии - стабилизация, накопление и?ядерная транслокация транскрипционного фактора HIF1a. На основе линии светлоклеточного рака почки Caki1 мы получили и?охарактеризовали модельную клеточную линию со стабилизированным белком HIF1a, которая позволит исследовать механизмы изменения уровня метилирования ДНК при неизмененной активности Tet-белков, но при сохранении транскрипционного профиля генов, характерного для гипоксии. При помощи системы редактирования ДНК CRISPR/CAS9 мы отредактировали ген VHL. Мутантный белок VHL содержит разрушенную альфа-спираль на C-конце и?не может участвовать в?молекулярном пути протеосомной деградации фактора HIF1a; это приводит к?накоплению его в?ядре и?к?активации соответствующих генов мишеней. Анализ транскрипции генов показал, что в?этой клеточной линии наблюдается индукция генов, характерных для гипоксии. Используя полученную модель Сaki-1/VHLmut, возможно разделять эффекты, вызванные подавляемыми кислородом гидроксилазами семейства Tet и?другими механизмами метилирования/деметилирования ДНК при гипоксии.