Статья «ФЛУОРЕСЦЕНТНОЕ МЕЧЕНИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ЗОНДОВ TAQMAN С ПОМОЩЬЮ “КЛИК”-ХИМИИ ПО РЕАКЦИИ КАТАЛИЗИРУЕМОГО CU(I) АЗИД-АЛКИНОВОГО ЦИКЛОПРИСОЕДИНЕНИЯ (CUAAC), "БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ"»

Предложен метод получения олигонуклеотидных зондов TaqMan, основанный на постсинтетическом “клик”-мечении азидопроизводным флуоресцеина алкинильной боковой цепи остатков пиримидинов по реакции катализируемого Cu(I) диполярного [3 + 2]-циклоприсоединения азидов и алкинов (CuAAC). Олигонуклеотиды, содержащие алкинильную группу, были синтезированы с использованием разработанных авторами ранее дезоксиуридинового или дезоксицитидинового фосфитамидных мономеров. Были получены олигонуклеотидные зонды TaqMan, содержащие на 3-конце гаситель флуоресценции и в различных внутренних положениях остаток флуоресцеина. Показано, что данные зонды позволяют детектировать накопление продукта в ходе ПЦР в режиме реального времени. Отмечено, что при сближении флуоресцентной метки с 3-концом, несущим гаситель, эффективность гашения флуоресценции возрастает (уровень фоновой флуоресценции падает).