Статья «ПРИМЕНЕНИЕ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ ДЛЯ ОЦЕНКИ ИЗМЕНЕНИЯ УРОВНЯ ЛИПИДОВ В ЛИПИДНЫХ ТЕЛЬЦАХ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПРИ ДЕЙСТВИИ АРАХИДОНОВОЙ КИСЛОТЫ И МЕТИЛ- -ЦИКЛОДЕКСТРИНА, "Биологические мембраны: Журнал мембранной и клеточной биологии"»

Липидные тельца (ЛТ) ? динамические клеточные органеллы, вовлеченные в различные процессы клеточного метаболизма и внутриклеточной сигнализации. Их ядро состоит, главным образом, из триацилглицеринов (ТАГ) и эфиров холестерина (ЭХ). Работа посвящена использованию проточной цитометрии для количественного анализа изменения уровня липидов, окрашенных флуоресцентным красителем нильским красным (НК), в ЛТ эпителиальных клеток. Объектом исследования служили нефиксированные свежевыделенные эпителиальные клетки мочевого пузыря лягушки Rana temporaria, обладающие мелкими, диффузно локализованными в цитоплазме ЛТ. В качестве экспериментальных воздействий использовали арахидоновую кислоту (АК), известного стимулятора образования ЛТ, и метил- -циклодекстрин ( ЦД), применяемого для селективного извлечения холестерина из липидных рафтов плазматической мембраны. Клетки инкубировали с 10?50 мкМ АК в течение 1 ч или с 400?2000 мкМ ЦД в течение 30 мин, после чего окрашивали НК и определяли флуоресценцию ( _возб = 488 нм, _эм = 575 ± 15 нм) на проточном цитометре; в этих же клетках анализировали боковое светорассеяние (SS). Инкубация клеток с АК дозозависимо увеличивала флуоресценцию НК. Эффект при использовании максимальной концентрации АК составил 41 ± 2.2% и 15 ± 3.4% (p < 0.001) для флуоресценции НК и величины SS соответственно. Анализ содержания липидных классов в клеточных экстрактах выявил увеличение в присутствии 10 мкМ АК соотношения ТАГ к холестерину в 1.7 раза, к фосфолипидам ? в 1.8 раза (p < 0.001). ЦД, начиная с концентрации 400 мМ, дозозависимо снижал флуоресценцию НК и величину SS, его эффект при использовании этой дозы сопровождался уменьшением относительного уровня холестерина на 6% (p < 0.01) и эфиров холестерина на 21% (p < 0.001). Это свидетельствует о расходовании ЭХ из ЛТ при потере холестерина из липидных рафтов плазматической мембраны. Таким образом, используя вещества, оказывающие противоположные влияния на ЛТ, и действующие на разные классы нейтральных липидов, содержащихся в ЛТ, мы показали, что проточная цитометрия с использованием НК позволяет быстро, с большой чувствительностью и хорошей воспроизводимостью регистрировать как накопление липидов в небольших по размеру ЛТ, так и уменьшение их уровня в живых клетках, не специализированных на создании жирового депо.