Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста
Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста

Статья «ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ АДЕНИН-ДНК-ГЛИКОЗИЛАЗЫ MUTY ИЗ E. COLI С ДНК-СУБСТРАТАМИ, "БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ"»

Авторы:
  • ТЮГАШЕВ Т.Е. 1
  • КУЗНЕЦОВА А.А. 2
  • КУЗНЕЦОВ Н.А.
  • ФЕДОРОВА О.С.
стр. 18-28
Платно
1 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, 630090, Новосибирск, просп. акад. Лаврентьева, 8; Новосибирский государственный университет, 630090, Новосибирск, ул. Пирогова, 2, 2 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, 630090, Новосибирск, просп. Акад. Лаврентьева, 8; Новосибирский государственный университет, 630090, Новосибирск, ул. Пирогова, 2
Аннотация:
Исследованы кинетические особенности специфического узнавания поврежденных пар нуклеотидов ферментом аденин-ДНК-гликозилазой MutY в модельных ДНК-субстратах, содержащих в центральном положении oxoG/A-, G/A-, oxoG/C- и F/G-пары. Конформационные изменения фермента MutY в процессе узнавания поврежденной пары оснований в ДНК были зарегистрированы по изменению интенсивности флуоресценции остатков триптофана методом “остановленной струи” в режиме реального времени. Для регистрации конформационных изменений ДНК использовали ДНК-дуплексы, содержащие остаток флуоресцеина. Анализ кинетических кривых позволил определить значения констант скорости кинетических стадий взаимодействия. Показано, что на первой стадии происходит образование неспецифических контактов между ДНК-связывающим центром фермента и ДНК-дуплексом. Обнаружено, что дискриминация оснований Gua и oxoGua происходит на второй стадии взаимодействия MutY с ДНК-дуплексом. Данные, полученные для oxoG/C-субстрата, показали, что на второй стадии также происходит узнавание основания, расположенного напротив oxoGua. Adenine-DNA-glycosylase MutY recognizes highly specifically the oxoG/A-pair in DNA by the formation of multiple contacts with oxoGua and Ade bases. The present work is aimed to clarify the kinetic characteristics of the specific recognition of the damaged base pairs by MutY in the model DNA-substrates contained in a central position oxoG/A-, G/A-, oxoG/C- and F/G-pairs. The conformational changes of enzyme were detected in real time by stopped-flow recording of the tryptophan fluorescence intensity during recognition process. DNA duplexes contained a fluorescein residue were used to detect the conformational changes of DNA. Analysis of the kinetic curves allowed determining the rate constants of reaction steps. It was shown that the first step of enzyme-DNA interaction reflected the formation of nonspecific contacts between DNA-binding site of enzyme and DNA-duplex. The data indicated that the discrimination of Gua and oxoGua bases occured in the second step of MutY interaction with DNA-duplex. Further, data obtained for oxoG/C-substrate revealed that recognition of base located opposite oxoGua also proceeded in the second step. Keywords: adenine-DNA-glycosylase, enzyme specificity, conformational changes, pre-steady state kinetics

Архивные статьи (2015 год и ранее) доступны для ознакомления бесплатно, для скачивания их необходимо приобрести. Для просмотра материалов необходимо зарегистрироваться и авторизоваться на сайте.

Чтобы приобрести доступ к материалу для юридического лица, пожалуйста, свяжитесь с администрацией портала с помощью формы обратной связи либо по электронному адресу libnauka@naukaran.com.  

Действия с материалами доступны только авторизованным пользователям.