Статья «ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКАЯ ВИЗУАЛИЗАЦИЯ РЕЦЕПТОРА Р185HER2 С ПОМОЩЬЮ АНТИТЕЛ, СОЕДИНЕННЫХ С ДИБАРНАЗОЙ, И КОНЪЮГАТОВ БАРСТАРА С КОЛЛОИДНЫМ ЗОЛОТОМ, "Молекулярная биология"»

Методами световой, конфокальной и электронной иммунной микроскопии изучена локализация трансмембранного рецептора Р185^HER2 в опухолевых клетках SKOV-3 и BT-474. Р185^HER2 служит маркером злокачественных опухолей молочной железы и яичников, а также мишенью для противоопухолевой терапии. Чрезвычайно важен правильный выбор универсального иммуноцитотоксического агента, с помощью которого можно, во-первых, изучать распределение Р185^HER2 в раковых клетках, во-вторых, удалять рецептор с поверхности и, в-третьих, разрушать клетки-мишени. В представленной работе для визуализации Р185^HER2 предложена иммуноцитотоксическая система, состоящая из моноклонального миниантитела 4D5 (scFv) против внеклеточного домена Р185^HER2, соединенного с двумя молекулами барназы ? цитотоксической РНКазы из Bacillus amyloliquefaciens, и ее специфического ингибитора барстара. При помощи флуоресцентной микроскопии показано, что модуль 4D5 scFv-дибарназа:барстар эффективно выявляет Р185^HER2 на поверхности раковых клеток. С помощью конфокальной микроскопии установлено, что взаимодействие с 4D5 scFv-дибарназой приводит к интернализации Р185^HER2. Электронно-микроскопически с использованием комплексов 4D5 scFv-дибарназа:барстар-Au и 4D5 scFv-дибарназа-Au проведена сравнительная локализация Р185^HER2 в клетках рака яичников (SKOV-3) и молочной железы (BT-474) человека. На поверхности клеток Р185^HER2 распределен неравномерно, располагаясь преимущественно на выростах, у их основания и в местах контакта выростов с телом клетки. При температуре 37°C Р185^HER2 интернализуется через окаймленные ямки и везикулы и в клетках обеих линий концентрируется в эндосомах и мультивезикулярных тельцах, а в клетках BT-474 также в лизосомах.