Статья «ПОЛУЧЕНИЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НЕИНФЕКЦИОННОГО ВИЧ-1 КЛОНА mzNL4-3 С БОЛЬШОЙ ДЕЛЕЦИЕЙ В pol-ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, "Молекулярная биология"»

Инактивация ферментов интегразы и обратной транскриптазы может привести к потере репликативной активности вирионов ВИЧ; и такие неинфекционные вирусоподобные частицы (ВПЧ) востребованы в качестве кандидатов на вакцину. Введя мутацию в ген pol, мы получили репликативно неактивные вирусные частицы ВИЧ-1, которые подходят для разработки вакцин и вирусологических исследований. В область pol провирусной ДНК (pNL4-3) с помощью рестриктазы Bal I вводили 2 разрыва, и полученные концы лигировали. Сконструированной плазмидой (pmzNL4-3) трансфицировали клетки HEK 293Т ? чтобы они продуцировали мутантные вирионы. Продукцию ВПЧ и их биологическую активность оценивали соответственно по количеству белка р24 и синцитийобразующей способности в клетках МТ2. Показано, что частицы mzNL4-3 самособираются и содержат функционально активныe гликопротеины оболочки (ENV); при этом mzNL4-3 ВПЧ не способны инфицировать ни клетки MT2, ни HEK 293T. Иммуногенность ВПЧ исследована на мышиной модели. Показано, что при повторной иммунизации животных титр ENV-специфичных антител резко возрастал, а лимфоидные клетки, выделенные из этих мышей, пролиферировали под действием антигена. Таким образом, mzNL4-3 ВПЧ содержат иммуногенные антигены ВИЧ-1 и могут эффективно индуцировать гуморальный и CD4-опосредованный иммунный ответ. Так как mzNL4-3 представляют собой неинфекционные ВПЧ, работать с ними можно в условиях второго уровня биологической защиты (BSL2 по международной классификации). Более того, частицы mzNL4-3, по-видимому, можно рассматривать в качестве кандидата для разработки анти-ВИЧ-1 вакцины.