Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста
Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста

Статья «ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОГО ЦЕНТРА ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОЗИДМОНОФОСФАТКИНАЗЫ БАКТЕРИОФАГА Т5 МЕТОДОМ САЙТ-НАПРАВЛЕННОГО МУТАГЕНЕЗА, "Биоорганическая химия"»

Авторы:
  • Микулинская Г.В.1
  • Таран С.А.2
  • Скоблов Ю.С.3
  • Феофанов С.А.4
стр. 680-
Платно
1 Филиал Института биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290, Пущино, проспект Науки, 6, 2 Филиал Института биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290, Пущино, проспект Науки, 6, 3 ФГБУН Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10, 4 Филиал Института биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290, Пущино, проспект Науки, 6
Аннотация:
На основании компьютерной модели активного центра дезоксирибонуклеозидмонофосфаткиназы бактериофага Т5 (dNMPKT5) определены аминокислотные остатки, важные для ферментативной активности. В результате сайт-направленного мутагенеза, клонирования и экспрессии гена dNMPKT5 в клетках <i>E. coli</i> получен ряд белков, содержащих единичные замены консервативных аминокислотных остатков активного центра ? S13A, D16N, T17N, T17S, R130K, K131E, Q134A, G137A, T138A, W150F, W150A, D170N, R172I, E176Q. После ионообменной и аффинной хроматографической очистки полученные препараты мутантных форм белка были электрофоретически гомогенными. Исследование ферментативной активности этих белков на природных акцепторах фосфорильной группы (dAMP, dCMP, dGMP, dTMP) показало, что замены заряженных аминокислот NMP-связывающего домена ? R130, R172, D170 и E176 ? приводят к практически полной потере ферментативных свойств. Установлено, что для каталитической активности фермента важно наличие НО-группы аминокислотного остатка в положении 17. На основании изменений удельной активности мутантных форм фермента предполагается, что остатки аргининов 130 и 172 участвуют в связывании <img src="/ItemImages/1147947/20398978/FO_1_1.gif" align=absmiddle border=0> -фосфорильной группы донора и <img src="/ItemImages/1147947/20398978/FO_2_1.gif" align=absmiddle border=0> -фосфорильной группы акцептора, а остаток аспарагиновой кислоты в положении 16 АТР-связывающего сайта также участвует в связывании ряда акцепторов фосфорила, прежде всего dTMP. Непропорциональное изменение ферментативной активности на разных субстратах у частично активных мутантов ? G137A, T138A, T17N, Q134A, S13A, D16N ? позволяет предполагать, что в связывании разных акцепторов фосфорила участвуют разные аминокислотные остатки.

Архивные статьи (2015 год и ранее) доступны для ознакомления бесплатно, для скачивания их необходимо приобрести. Для просмотра материалов необходимо зарегистрироваться и авторизоваться на сайте.

Чтобы приобрести доступ к материалу для юридического лица, пожалуйста, свяжитесь с администрацией портала с помощью формы обратной связи либо по электронному адресу libnauka@naukaran.com.  

Действия с материалами доступны только авторизованным пользователям.