Статья «НОВЫЙ ПОДХОД К ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПИРАЗИНАМИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МБТ КАК МАРКЕРА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ПИРАЗИНАМИДУ, "Вестник Центрального научно-исследовательского института туберкулеза"»

Введение. Пиразинамид – противотуберкулезный препарат первого ряда, который является пролекарством. В активную форму – пиразиновую кислоту, пиразинамид превращается под действием микобактериального фермента – пиразинамидазы. Тестирование фенотипической чувствительности к пиразинамиду технически сложно, так как пиразинамид проявляет активность только в кислой среде. Единственным методом, рекомендуемым ВОЗ для определения чувствительности к пиразинамиду, является метод пропорций на жидкой среде Middlebrook 7H9 в системе автоматизированной детекции роста микобактерий BACTEC MGIT 960. Альтернативным способом определения чувствительности к пиразинамиду является метод Wayne L.G., определяющий активность пиразинамидазы (Wayne L.G., 1974; Chang K.C. et al., 2011) как маркера чувствительности к пиразинамиду. В основе метода лежит цветная реакция окисления двухвалентного железа соли Мора до трехвалентного железа под действием образующейся пиразинамидазы пиразиновой кислоты. Метод состоит из следующих последовательных шагов: получение достаточной для тестирования бактериальной массы; пересев и инкубация культуры на подкисленной агаровой среде с пиразинамидом; добавление индикатора (соль Мора) и инкубация с ним; оценка результатов колориметрической реакции. Основными недостатками классического теста определения пиразинамидазной активности являются пересев и длительная (7 дней) инкубация культуры на агаровой среде с пиразинамидом и оценка колориметрической реакции по узкой полосе на границе сред, что создает трудности для интерпретации результата. Устранение хотя бы одного (а в идеале двух) из этих недостатков при создании нового теста позволит существенно повысить эффективность проведения анализа и снизить трудозатраты. Цель исследования: разработать новый подход к оценке активности пиразинамидазы с улучшенной визуализацией результата, тем самым сократив время и трудозатраты на проведение анализа.