Статья «Получение и характеристика неиммортализованных клеточных линий дермальных фибробластов человека, выделенных из кожи век взрослых доноров разного возраста, "Цитология"»

Получены новые неиммортализованные клеточные линии человека из кожи век трех взрослых доноров в возрасте 37, 45 и 53 года, названные ЭР-1, ЭР-2 и ЭР-3 соответственно. Проведен сравнительный анализ ростовых характеристик и дифференцировочного потенциала этих линий и подтвержден их статус как линий мезенхимных стволовых клеток. Основные характеристики получены на 6-м пассаже. Среднее время удвоения клеточных популяций составляет 40, 35 и 33 ч для линий ЭР-1, ЭР-2 и ЭР-3 соответственно. Наблюдаемые различия по ростовым характеристикам клеточных линий не отражают возрастной зависимости, т. е. увеличения среднего времени удвоения с увеличением возраста от 37 до 53 лет, а, скорее, могут быть связаны с генетическими особенностями доноров. Кривые роста свидетельствуют об активной пролиферации всех линий. Эффективность клонирования невысокая, но одинаковая для всех линий. Вступление клеток в фазу репликативного старения наблюдается на 25-м пассаже, что составляет более 50 удвоений клеточных популяций и свидетельствует о неиммортализованности линий. Количественный и структурный кариотипический анализ показал, что линии имеют нормальный кариотип 46, XX. Но для линий ЭР-1 и ЭР-3 показано наличие ряда неклональных хромосомных перестроек. Для определения статуса линий провели сравнительный анализ поверхностных маркеров с помощью проточной цитофлуориметрии. Анализ выявил во всех линиях экспрессию поверхностных антигенов, характерных для МСК человека (СЭ44, СЭ73, СЭ90, СЭ105 и НЬА-ЛБС), и отсутствие экспрессии СЭ34, СЭ45 и НЬА-ОК. Иммунофлуоресцентный анализ показал наличие экспрессии виментина во всех линиях, подтвердив статус МСК. Показана экспрессия коллагена 1-го типа, характеризующего фибробласты. Проточная цитофлуориметрия и иммунофлуоресцентный анализ показали наличие экспрессии маркера недифференцированных эмбриональных стволовых клеток - 88БА-4 - и маркеров их ранней дифференцировки в производные трех зародышевых листков, что, по-видимому, обеспечивает широкие возможности линий дермальных фибробластов при репарации разных тканевых повреждений. Показана способность клеток всех линий дифференцироваться в остеогенном, хондрогенном и адипогенном направлениях. В линии ЭР-3 уровень остеогенной дифференцировки значительно ниже, чем в ЭР-1 и ЭР-2. Возможно, что низкий уровень дифференцировки связан с большим возрастом донора (53 года). По остальным характеристикам зависимости от возраста донора (37-53 года) не обнаружено.