Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста
Войти / Регистрация
Корзина

  • Ваша корзина пуста

Статья «Модуляция ферментативной активности нуклеозидтрифосфатазы/хеликазы неструктурного белка NS3 вируса лихорадки денге под воздействием поли^), "Биохимия"»

Авторы:
  • Джунейд М.
  • Ангсутанасомбат С.
  • Викберг Дж.Е.С.
  • Али Н.
  • Катценмейер Г.
стр. 1178-1186
Платно
  • В выпуске: №8, 2013, Том 78
  • В журнале: Биохимия
  • Издательство: ФГУП «Издательство «Наука»
  • Рубрика ГРНТИ: Химия. Биология. Медицина.
  • Год выхода: 2013
  • SDI: 007.001.0320-9725.2013.000.008.1178.1186
  • ISSN: 0320-9725
Ключевые слова:
  • НТРаза
  • NTPase
  • dengue virus
  • NS3 protein
  • Helicase
  • вирус лихорадки денге
  • белок NS3
  • хеликаза
Аннотация:
Неструктурный белок 3 (NS3) флавивирусов обладает ферментативными активностями, играющими ключевую роль в репликации этих вирусов, и может служить наиболее подходящей мишенью для противовирусной терапии. NS3 вируса лихорадки денге типа 2 (DEN2) состоит из двух доменов: N-концевого (NS3pro), являющегося сериновой протеазой и С-концевого (NS3h), обладающего активностью фермента, названного РНК-зависимой нуклеозидтрифосфатазой (НТРаза)/РНК-хеликазой. В представленной работе создана с помощью ПЦР плазмида, несущая хеликазный домен (NS3h) белка NS3 вируса DEN2. Рекомбинантный белок NS3h (Mr 56,5 кДа) был очищен методом металлаффинной хроматографии в денатурирующих условиях, а затем ренатурирован в присутствии искусственных шаперонов с получением активной хеликазы. Активность НТР гидролазы белка NS3 определяли с использованием малахитового зеленого. Установлено, что в присутствии поли(Ц) эта активность повышалась в ~4 раза; при этом увеличивалось число оборотов фермента (k <sub>cat</sub>) в то время как снижалась K <sub>m</sub>. Активность хеликазы определяли по изменению собственной флуоресценции коротких олигодезоксирибонуклеотидных искусственных субстратов. Показано, что в отсутствие полинуклеотидов, таких как поли(U), наблюдалось значительное увеличение флуоресценции искусственного субстрата под действием хеликазы. Добавление поли(U) приводило к подавлению способности хеликазы расплетать цепи ДНК. Описанный нами подход может быть использован для дальнейшей характеристики субстратной специфичности хеликазы, а также для разработки высокопроизводительного метода тестирования активностей НТРазы/хеликазы с целью поиска соответствующих специфических ингибиторов.

Архивные статьи (2015 год и ранее) доступны для ознакомления бесплатно, для скачивания их необходимо приобрести. Для просмотра материалов необходимо зарегистрироваться и авторизоваться на сайте.

Чтобы приобрести доступ к материалу для юридического лица, пожалуйста, свяжитесь с администрацией портала с помощью формы обратной связи либо по электронному адресу libnauka@naukaran.com.  

Действия с материалами доступны только авторизованным пользователям.